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Affymetrix官方软件 Expression Console的使用

来源:小云发布时间:2016-08-26

Affymetrix官方软件EC的使用
 
Affymetrix是全球三大芯片之一,提供不同层面、不同物种、不同定制需求的基因芯片,在此基础上,为方便用户利用数据,平台开发有针对性的解析和分析软件,今天小编就给大家简单介绍一款Affymetrix软件:Expression Console 。
问:那这款软件能解决什么问题呢?应用范围是什么?能做差异分析吗?能做功能通路富集吗?能做高大上的网络分析吗?
答:Expression Console是Affymetrix开发专门用于数据解析和质控的一款软件;只适用于Affymetrix的芯片产品;不可以直接用于差异分析,但可以为差异分析提供标准化的.chp源头文件,是进行差异分析的基础;不可以用于功能通路富集,也不可以用于网络分析,但Affymetrix的另一款软件Transcriptome Analysis Console可以。
 
回归正题,我们来扒一扒Expression Console的喜恶,最喜欢的自然是“原始数据解析”,最喜欢探究别人心里的小秘密,总喜欢将.cel扒拉成.chp;


 
但它也是个有责任心的主儿,兢兢业业,严格把关,即对芯片检测是否合格作出判断,具体可分为3个指标:杂交质控、PolyA质控、芯片信号值与背景值,每个指标有各自的合格标准,稍有偏差,就是Outside;
①杂交质控合格标准——  BioB<BioC<BioD<Cre
②PolyA质控合格标准——  Lys<Phe<Thr<Dap
③芯片信号值与背景值—— 信号值>背景值


 
然而,具体如何操作,可参考以下流程:
一、Affymetrix官网注册及软件下载
在浏览器中输入Affymetrix(http://www.affymetrix.com/estore/)网址,进入,主页如下,点击注册Register,根据提示完成信息录入,完成注册。

 
 

 
注册完成后,登陆,点击Support——Affymetrix Microarray Solutions,进入产品支持界面;

 
点击software Downloads,进入软件下载界面;

然后选择Expression Console Software,目前官网上这款软件只有64位,电脑是32位的小伙伴们是安装不了的哟………..

 
快快安装起来,方法很EASY,跟着提示走就OK啦,只有一点,小伙伴们在设置储存路径的时间,一定一定要使用英文路径,否则软件无法识别,例如存储在G盘,路径必须是G/英文/英文,半个中文都不可以有。
 
 
二、EC软件的安装、库文件(library files)和注释文件(Annotation files)的下载
打开Expression Console软件,会自动弹出用户名对话框,这个大家随便填就OK了,只要是英文即可,然后点击OK;

 
点击File—Download library files,弹出NetAffx Account Information对话框,将注册好的邮件和密码输进去,点击OK;
 

点击OK后,弹出NetAffx library files对话框,对话内呈现的是Affymetrix芯片类型;

选择自己相关芯片类型,在方框内点击打钩,并点击Download键,进入library file下载,该过程耗时长,要耐心等候;


下载完成后,会在对应芯片后出现“currently installed”的字样,代表下载完成,然后关闭该对话框;
 

接着,点击File—Download Annotation files,弹出NetAffx Account Information对话框,将注册好的邮件和密码输进去,点击OK即可;
 

 
点击OK后,弹出NetAffx Annotation files对话框,对话内呈现的也是Affymetrix的芯片类型,但下载内容是芯片的注释文件,和上文中的下载的library files是不一样的,大家注意区分。
然后,选择对应芯片,在方框内点击打钩,并点击Download键,进入Annotation file下载,该过程同样耗时长,下载完成后,关闭对话框。

自此,Expression Console软件的安装和文件准备工作都已完成,终于可以进入正题啦,下面小编以一份U133 plus2.0芯片的原始数据,给大家展示一下如何使用EC;
 
三、EC软件的数据解析和芯片质控
点击File—New Study,弹出Affymetrix Study对话框;

 
点击Add Intensity键,弹出Select Probe Cell Intensity Files,选择原始文件.cel,点击Open;
 


点击Open后,弹出Available Analysis对话框,选择3’ Expression Array-RMA,点击OK;



点击OK后,弹出Expression Console—rma-menu对话框,在对话框内自行输入保存名称;


然后,点击Run Analysis,运行过程比较久,小伙伴们可让电脑自行运行;

运行结束后,会自动生成对应的.chp文件,chp文件是对数标准化后的结果,可以被TAC软件识别,用于下游的差异分析。界面中的within Bounds说明芯片合格,即杂交质控、PolyA质控、芯片信号值与背景值都符合正常标准;

 
若出现红色高亮,并呈现“Outside Bounds”,表明芯片不合格,后期分析中除去这些不合格的芯片数据;

                               
 
今天Expression Console就介绍到这里,回顾一下,EC主要就是对Affymetrix芯片进行质控和数据解析,也为TAC软件提供源头文件.chp,下游的差异分析则需要TAC来完成,欲知TAC,请看下回分解。